Сначала нужно определиться - кнопки именно что не работают или просто не нажимаются.
На ум приходит 5 сценариев:
1) Что-то мешает.
Иерархия интерфейса устроена таким образом, что чем выше в иерархии объект, тем раньше он рисуется. Возможно ниже по иерархии есть иной графический элемент (даже если он в этом месте прозрачен, главное чтобы был включен), который перехватывает нажатие на себя. Нужно либо поменять иерархию, либо отключить галочку Raycast Target на всех объектах, которые мешают нажатию (ну или просто подвигать)
2) Кнопка в принципе выключена.
Проверьте, включено ли свойство Interactable кнопки
3) Возможно сама кнопка не слушает нажатия.
Проверьте на всякий случай, рядом с кнопкой на том же объекте должен лежать текст или картинка и там галочка Raycast Target должна быть включена.
4) На сцене нет Event System
Эта штука находится в меню создания UI / Event System
5) Сам канвас не слушает нажатия - проверьте чтобы на канвасе был включенный компонент "Graphic Raycaster"
Но может быть и так, что событие у самой кнопки просто не настроено (On Click)