file = open('Файл.txt', 'r', encoding = 'utf-8'), то есть работаю с файлом, который находится в папке с main.py,
Неправильно. Ты работаешь с файлом, который находится в текущем рабочем каталоге, так как ты указал относительный путь (т.е. не от корня диска).
Текущий рабочий каталог может совпадать или не совпадать с каталогом, в котором находится скрипт. Это зависит от поведения программы, которая скрипт запускает, будь то проводник винды, командная строка или ещё что. Кроме того, программа может менять свой текущий рабочий каталог при желании.
Иными словами, ты не контролируешь, какой будет рабочий каталог на момент запуска программы - разве что поменяешь его самостоятельно.
Так что лучше указывать абсолютный путь. Самый простой способ - получить из sys.argv[0] путь к скрипту и подняться на уровень выше. Вот тогда получишь путь к папке где лежит твой скрипт. И от этого пути уже отталкивайся.
Операции с путями удобнее всего делать с помощью
pathlib, или по старинке с помощью
os.path.