зависит от очень могих факторов:
если вы заранее знаете количество переменных, то достаточно
with open('test.txt', 'r') as file:
v1, v2 = file.readline().split(';')
print(v1, v2)
В противном случае всё повеселее
with open('test.txt', 'r') as file:
lineindex = 0
for line in file:
values = line.split(';')
for colindex in range(len(values)):
globals()[f'v_{lineindex}_{colindex}'] = values[colindex]
lineindex += 1
print(v_0_0, v_0_1)
но возможно на глобальные переменные бить не надо, если достаточно просто сложить в список, то
with open('test.txt', 'r') as file:
acc = []
for line in file:
acc.append(line.split(';'))
print(acc)